Immortalized Human Granulosa Cells (HGL5)

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BioSafety Level	II
Organism	Homo sapiens
Source Organ	Ovaries
Growth Properties	Adherent
Recommended Seeding Density	20,000 cells/cm2
Applications	For Research Use Only
Immortalization Method	Serial passaging and transduction with retroviruses carrying human papilloma virus strain 16 (HPV16) oncogenes E6/E7
Description	Human ovarian granulosa cells are the sites of estrogen and progesterone production, making them critical in studying steroid biosynthesis, steroid-metabolizing enzymes, particular growth factors, and gonadotropins. The Immortalized Human Granulosa Cells (HGL5) exhibits qualities consistent with primary ovarian granulosa cells; this includes cell retraction in response to protein kinase-A activation, the ability to produce progesterone and estradiol, and the enzyme integral to estradiol production, P450arom. All of these characteristics make the Immortalized Human Granulosa Cell Line an attractive model to study mechanisms relating to steroid biosynthesis and metabolism, in addition to other pathways.
Procedure Overview
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Propagation	Use of PriCoat? T25 Flasks (G299) or Applied Cell Extracellular Matrix (G422) is required for cell adhesion to the culture vessels. Grow cells in ECM-coated culture vessels with the following conditions. The base medium for this cell line is Prigrow IV medium available in ABM, Cat. No.TM004. To make the complete growth medium, add the following components to the base medium: 2% Cosmic Calf Serum (Hyclone), 2% Ultroser G (Pall Corporation), 1% ITS plus (Zen-Bio), and 1% Penicillin/Streptomycin(G255). Atmosphere: air, 95%; Carbon dioxide (CO2), 5%.Temperature: 37.0°C. Low serum media for experiments: The base medium for this cell line is Prigrow IV medium available in ABM, Cat. No.TM004. To make the complete growth medium, add the following components to the base medium: 0.2% Ultroser SF (Pall Corporation), 1% ITS plus (Zen-Bio), and 1% Penicillin/Streptomycin(G255). Atmosphere: air, 95%; Carbon dioxide (CO2), 5%.Temperature: 37.0°C.
Subculturing	1. Dilute Trypsin-EDTA (TM050) to final concentration of 0.05%, and use to trypsinize cells for 3-5 minutes at room temperature 2. Gently tap flask to remove cells, and pipette cells up and down in flask before transferring to sterile conical vial with growth media. 3. Centrifuge cells at 200 x g for 3 minutes. 4. Aspirate supernatant from pellet and resuspend cells with fresh growth medium to plate cells. Be sure to use T25 ECM-coated flasks(G299) for growth.
Preservation	1. Freeze Medium: Complete growth medium with 20% FBS and 10% DMSO. 2. Storage Temperature: Liquid nitrogen vapour phase.
Quality Control	(1) Expression of viral genes quantified by PCR; (2) cAMP, progesterone and estradiol production were measured after induction with forskolin, dbcAMP, follicle-stimulating hormone (FSH), or luteinizing hormone (LH) treatments; (3) p450arom regulation characterized via North blot analysis.
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