Immortalized Mouse Cortical Collecting Duct Cell Line (mCCD(cl1))

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BioSafety Level	II
Organism	Mus musculus
Source Organ	Kidney
Growth Properties	Adherent
Recommended Seeding Density	In early passages, the cells do not form domes and grow more slowly. Split low passage cells at 1:6 ratio. At higher passages (above p15), the cells grow more rapidly and are recommended to be split at 1:10 ratio.
Applications	For Research Use Only
Immortalization Method	Spontaneously immortalization
Cell Type Characterization
Description	In aldosterone-sensitive distal nephron (ASDN), mineralocorticoid receptor (MR) and glucocorticoid receptor (GR) activation regulate ionic and water transports through the epithelial sodium channel (ENaC) and the Na+/ K+ pump. The Immortalized Mouse Cortical Collecting Duct Cell Line is a spontaneously transformed cell line that expresses significant level of functionally active MR and GR, as well as active 11β-hydroxysteroid dehydrogenase type 2 (11β-HSD2) enzyme. In addition, this cell line responses to physiological concentrations (K(1/2)= 0.3 nM) of aldosterone, making it useful for binding equilibrium assays and studies on sodium transport response to various mineralocorticoid and glucocorticoid agonists.
Procedure Overview
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Propagation	Use of PriCoat? T25 Flasks (G299) or Applied Cell Extracellular Matrix (G422) is required for cell adhesion to the culture vessels. Grow cells in ECM-coated culture vessels with the following conditions. The base medium for this cell line is Prigrow IV medium available from ABM (TM004). To make the complete growth medium, add the following components to the base medium: 2% fetal calf serum, 0.87 μM insulin, 5 μg/ml human apotransferrin, 10 ng/ml EGF, 1 nM T3, 30 nM dexamethasone and 1% Penicillin/Streptomycin (G255). Atmosphere: air: 95%, CO2: 5%; Temperature: 37.0°C.
Quality Control	1) Immunofluorescence and RT-PCR were used to confirm the expression of epithelial sodium channel (ENaC) and Na-K-ATPase; 2) RT-PCR was used to detect expression of MR, GR, and 11β-HSD2 ; 3) sodium transport response assayed through short-circuit current (electrophysiologic studies) and binding assays.
Disclaimer
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