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大鼠肺泡上皮細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)

大鼠肺泡上皮細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)

　　1．(大鼠肺泡上皮細(xì)胞)取產(chǎn)后的新鮮臍帶。如不立即培養(yǎng)可以保存于4℃中，但不宜超過12小時(shí)。無菌剪取長10～15厘米一段。其它如胚胎和幼體動(dòng)物的大血管，亦可用于培養(yǎng)。

　　2．先用三通注射器吸溫PBS液注入臍帶的靜脈中，洗除殘血，注入口處宜用線繩結(jié)扎，以防液體返流。

　　3．用血管鉗夾緊臍帶一端，從另端向臍靜脈中徐徐注入終濃度為0.1%的膠原酶，待末端出現(xiàn)液體后結(jié)扎之，令充滿血管，注入口亦應(yīng)結(jié)扎，以防液體返流，消化3～10分鐘。

　　4．吸出含有內(nèi)皮細(xì)胞的消化液，注入離心管中，為獲取更多細(xì)胞，可再注入溫PBS沖洗2～3次徹底干凈殘余細(xì)胞，一并注入離心管中離心。

　　5．吸除上清，加1640培養(yǎng)液，制成(大鼠肺泡上皮細(xì)胞)細(xì)胞懸液，接種入瓶皿中培養(yǎng)，順利時(shí)2～3天內(nèi)細(xì)胞即可長成單層。

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