人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞概述

人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞概述
消化細(xì)胞

　　消化液：用pH7.0-7.2的PBS或D-Hank’S液，分別配制0.25%胰酶液和0.02%EDTA-Na2液，用前按1：1混合。在細(xì)胞傳代或凍存前先消化細(xì)胞。(人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞)具體操作如下：吸凈培養(yǎng)液，每瓶加消化液1ml，搖勻使其布滿培養(yǎng)瓶細(xì)胞面。37℃消化2-5分鐘。顯微鏡下看細(xì)胞回縮成圓形后，輕輕震動(dòng)使絕大部細(xì)胞脫落后，每瓶加含10%FBS的RPMI-1640液的中和液4-5ml中和胰酶的消化作用，并用吸管輕輕吹打培養(yǎng)面使細(xì)胞完全脫落后，吸至15ml無菌離心管內(nèi)。4℃1500rpm離心10分鐘棄上清，再用中和液洗滌細(xì)胞，離心棄上清，加適量RPMI-1640液，混勻后取10ul 細(xì)胞(人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞)懸液加10ul臺(tái)盼藍(lán)混勻后作細(xì)胞計(jì)數(shù)，按需要做步驟四或五。

細(xì)胞傳代

　　方法同步驟二。

細(xì)胞凍存

　　調(diào)整細(xì)胞數(shù)2-5×10個(gè)/ml，按含細(xì)胞的RPMI-1640液ml數(shù)，配制等量的凍存液。凍存液中FBS占80%，DMSO占20%。例：含細(xì)胞的RPMI-1640液為8ml，應(yīng)配凍存液8ml，其中FBS為6.4ml,DMSO為1.6ml，混勻。置細(xì)胞懸液于冰浴中，逐滴加入凍存液，邊加邊搖動(dòng)。加完后用吸管吹打混勻。于冰浴中分裝細(xì)胞于凍存管中，1.8ml/管，再將凍存管置于凍存盒內(nèi)置-80℃冰箱，24小時(shí)后轉(zhuǎn)入液氮中保存。

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