人臍靜脈血管內皮細胞的接種培養
細胞接種培養
1、細胞接種：
（1）、包被液：用去離水配制0.5%明膠溶液，過濾除菌。
（2）、人臍靜脈血管內皮細胞培養瓶包被：取2-4個T25培養瓶，每個培養瓶加2－3ml0.5%明膠溶液，搖勻使包被液布滿培養瓶底面，置37℃2小時或放置過夜。
（3）、接種細胞：人臍靜脈血管內皮細胞接種前吸凈包被液，按2500－5000個細胞/cm接種細胞（1支5×10個細胞可接種2-4個培養瓶），每瓶加培養液3-5ml,搖勻后置37℃5%CO2培養箱內培養24小時，此時細胞已完全貼壁，更換培養液后繼續在37℃5%CO2培養箱內培養。
（4）、擴大培養：一般每周更換培養液2次，至細胞長至覆蓋培養面的70-80%可進行傳代或凍存。
細胞凍存
調整細胞數2-5×10個/ml，按含細胞的RPMI-1640液ml數，配制等量的凍存液。凍存液中FBS占80%，DMSO占20%。例：含細胞的RPMI-1640液為8ml，應配凍存液8ml，其中FBS為6.4ml,DMSO為1.6ml，混勻。置細胞懸液于冰浴中，逐滴加入凍存液，邊加邊搖動。加完后用吸管吹打混勻。于冰浴中分裝細胞于凍存管中，1.8ml/管，再將凍存管置于凍存盒內置-80℃冰箱，24小時后轉入液氮中保存。
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